东北粗口国产床,久久国产精99精产国高潮,国产又滑又嫩又白

本文介紹蛋白質(zhì)濃度測(cè)定常見的另外一種方法，雙縮脲法，也稱Biuret法。

一、實(shí)驗(yàn)原理

雙縮脲，也稱氨縮脲、縮二脲等，它是兩個(gè)分子脲（即尿酸）在180℃左右加熱條件下脫出一個(gè)氨后縮合形成的一種有機(jī)物，分子內(nèi)含有兩個(gè)領(lǐng)接的肽鍵，其在堿性溶液中可與Cu2+發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物，這種反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。

蛋白質(zhì)分子中含有大量彼此相連的肽鍵，同樣可以在堿性條件下與Cu2+發(fā)生雙縮脲反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物，溶液顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度相關(guān)，與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，且溶液在540nm處的吸光度值與蛋白質(zhì)含量在一定范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，因此可以利用此法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

二、試劑與器材

1、試劑：

1）標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液：可用牛血清白蛋白（BSA）作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白，并用蒸餾水準(zhǔn)確配制成10 mg/mL 濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2）雙縮脲試劑：稱以1.50 g硫酸銅（CuSO4-5H2O）和6.0 g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6-4H2O），用500 mL蒸餾水溶解，在攪拌下加入300 mL10% NaOH溶液，使得溶液呈堿性，之后再用水稀釋到1升，并貯存于塑料瓶中（或內(nèi)壁涂以石蠟的瓶中）。可長(zhǎng)期保存，但若干瓶中出現(xiàn)黑色沉淀則需要重新配制。

3）待測(cè)蛋白溶液：應(yīng)適當(dāng)進(jìn)行稀釋，使得濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

2、器材：

分光光度計(jì)、恒溫水浴、移液器、渦旋混勻器、試管若干等。

三、操作方法

（1）移液。選取7支潔凈試管，其中5支標(biāo)號(hào)1-5號(hào)管，其他2支分別標(biāo)簽空白管和待測(cè)管。按照下表用移液器準(zhǔn)確移取相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液或待測(cè)樣品、蒸餾水和雙縮脲試劑于試管中。

（2）保溫。將上述各試管混勻后置于恒溫水浴鍋中37℃加熱20分鐘；

（3）測(cè)量吸光度。吸取各試管中的溶液于比色皿中并用分光光度計(jì)的540nm波長(zhǎng)測(cè)定各吸光度值A(chǔ)540；

（4）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)540為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（5）計(jì)算。將測(cè)得的待測(cè)蛋白吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度。

四、方法優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：

1、不同蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色深淺相近，干擾物少；

2、測(cè)定時(shí)間較短（20-30分鐘），方法較為簡(jiǎn)便快速

3、適用于需要快速但不需要很精確測(cè)定的蛋白質(zhì)測(cè)定

缺點(diǎn)：

1、靈敏度較低，測(cè)定范圍為1-20mg蛋白質(zhì)

2、干擾物質(zhì)主要是硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等

點(diǎn)成生物可提供多款高性能的恒溫水浴、移液器、渦旋混勻器等，滿足不同實(shí)驗(yàn)需要。

蛋白質(zhì)濃度測(cè)定之雙縮脲法