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微流控芯片用于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的研究

2025年08月03日 09:27:38      來源:廣州虹科電子科技有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺      閱讀量:8

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膠質(zhì)母細(xì)胞瘤為一種高度惡性,生長快、病程短的致死腫瘤疾病,它是成人見的原發(fā)性侵襲性腦腫瘤,每年大約有12,000名新增病例

由于其研究的特殊性,如何在體外模擬更真實的仿生環(huán)境一直是臨床研究的難點(diǎn),西班牙薩拉戈薩大學(xué)的研究小組成功攻克了這一難題,讓我們看看這是怎么做的吧!

一、研究快速導(dǎo)覽

背景:膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM〉是最致命的腫瘤類型之一。在這些腫瘤中,高細(xì)胞區(qū)被命名為假性細(xì)胞區(qū),并被推測為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移的波。這些細(xì)胞的”波浪”被認(rèn)為是由腫瘤引起的血管閉塞所造成的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)的消耗所誘發(fā)的。雖然這些結(jié)構(gòu)在GBM腫瘤中的普遍存在表明,它們可能在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的擴(kuò)散和入侵中發(fā)揮了重要作用,但在體外重新創(chuàng)造這些結(jié)構(gòu)仍然是一個挑戰(zhàn)。

方法:西班牙薩拉戈薩大學(xué)通過采用的體外細(xì)胞培養(yǎng)裝置——BE-Gradient 微流控芯片,模擬了假性細(xì)胞區(qū)形成的動態(tài)過程。將U-251 MG細(xì)胞嵌入微流控芯片的膠原水凝膠中,通過控制介質(zhì)在橫向微通道的流動,模仿和控制與這種疾病相關(guān)的血管阻塞事件。

結(jié)果:通過使用這個新的系統(tǒng),證明營養(yǎng)和氧氣的缺乏會引發(fā)一個強(qiáng)烈的遷移過程,導(dǎo)致體外假紫斑的產(chǎn)生。這些結(jié)果驗證了假性細(xì)胞區(qū)的假說,并顯示出與缺氧驅(qū)動生物學(xué)模型的出色一致性。

本研究有效的證明了BE-Gradient 微流控芯片作為的體外培養(yǎng)裝置,能夠很好的模擬在腫瘤演變過程中營養(yǎng)和氧氣的化學(xué)梯度變化。

二、BE-Gradient的實驗效果介紹

下面讓我們了解基于BE-Gradient 微流控芯片更多的實驗效果。

(1)BE-Gradient 微流控芯片模擬化學(xué)梯度變化的可能性展示(方案之一):

圖1 BE-Gradient 微流控芯片模擬營養(yǎng)和氧氣的缺乏區(qū)域(I)和富集區(qū)域(II)的示意圖

(2)微流控芯片細(xì)胞長期體外存活能力展示:

圖2 在9天后,U-251細(xì)胞在微流控芯片中的存活顯示,活細(xì)胞(用1μg/ml的鈣素標(biāo)記)顯示為綠色,死細(xì)胞顯示為紅色(用4μg/ml的碘化丙啶標(biāo)記)。白色虛線劃定了微型裝置柱(50x100 µm)。細(xì)胞在1.5mg/ml膠原水凝膠內(nèi)以400萬細(xì)胞/ml的速度培養(yǎng)

(3)假性細(xì)胞區(qū)形成的動態(tài)過程展示:

圖3 在限定條件下形成假性細(xì)胞區(qū)過程 將400萬cells/ml的U-251置于1.5mg/ml的膠原水凝膠中,在微型裝置內(nèi)培養(yǎng)。在不受限制的條件下,每天更換一次培養(yǎng)基,并在3天(A)、6天(B)和9天(C)使用鈣黃素(綠色)和碘化丙啶(紅色)評估細(xì)胞的活力。為了模擬受阻的情況,只讓介質(zhì)通過右側(cè)微通道流動,并在3(D)、6(E)和9(F)天評估細(xì)胞活力。白色虛線劃定了微裝置柱(50x100 µm)的界限。圖表顯示了在3天(G)、6天(H)和9天(I),在受阻和不受阻的情況下,整個微室正交視圖的熒光強(qiáng)度。圖中的邊界位置由灰色虛線劃定。比例尺為200μm。
圖4 假性細(xì)胞區(qū)形成期間的細(xì)胞形狀 在不受限制(A)或受阻(B)的條件下培養(yǎng)5天后,拍攝微室的共聚焦圖像。(C)分析了假性細(xì)胞區(qū)后部和前部的細(xì)胞形狀,并與無限制條件下的同一區(qū)域進(jìn)行比較;。(D) 在受阻條件下,假性細(xì)胞區(qū)后部的方向性。(E) 石蠟包埋的GBM樣本的蘇木精和伊紅染色。(F) 患者樣本中假頂點(diǎn)后部和前部的細(xì)胞核長寬比;比例尺為200µm。

參考文獻(xiàn):

[1]Jose, et al. “Glioblastoma on a microfluidic chip: Generating pseudopalisades and enhancing aggressiveness through blood vessel obstruction events.” Neuro Oncology (2017).

三、Be-Gradient的其他應(yīng)用

(1)產(chǎn)品介紹:Be-Gradient 由一個室(模擬細(xì)胞培養(yǎng))和兩條包含 3 個通向中心室的橫向通道(模擬血管)組成。用于模仿體外的細(xì)胞培養(yǎng)。它可以在化學(xué)梯度下進(jìn)行3D或2D細(xì)胞培養(yǎng)。由于其使用的聚合物具有一定的光學(xué)透明度,所以可以搭載顯微鏡、熒光顯微鏡和共焦顯微鏡輔助觀測。

    • 3D 細(xì)胞培養(yǎng):首先將細(xì)胞混合在液相水凝膠中,然后將它們引流至室中。水凝膠聚合完成后,通過橫向通道灌注具有不同濃度化合物的培養(yǎng)基,并實時監(jiān)測效果。

    • 2D 細(xì)胞培養(yǎng):適用于貼壁細(xì)胞,不僅可以在室中檢測,也可以在橫向通道中培養(yǎng)。

(2)應(yīng)用領(lǐng)域:細(xì)胞/球狀體入侵和遷移、血管新生、轉(zhuǎn)移、血管生成、趨化、缺血、細(xì)胞分化或氧化壓力、微型器件內(nèi)的壞死核心生成、葡萄糖梯度實驗。

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