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高壓細(xì)胞破碎儀廠家述細(xì)胞破碎的實(shí)驗(yàn)室方法

2025年06月30日 09:42:49      來(lái)源:北京華瑞創(chuàng)世科技有限公司 >> 進(jìn)入該公司展臺(tái)      閱讀量:10

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高壓細(xì)胞破碎儀廠家講述隨著重組DNA技術(shù)得到廣泛應(yīng)用以來(lái),生物技術(shù)發(fā)生了質(zhì)的飛躍。很多基固工程產(chǎn)物都是胞內(nèi)物質(zhì),必須將細(xì)胞破壁。使產(chǎn)物得以釋放。才能進(jìn)一步提取,因此細(xì)胞破碎是提取胞內(nèi)產(chǎn)物的關(guān)鍵步驟。破碎方法的得當(dāng)與否,直接影響到所提取產(chǎn)品的產(chǎn)量、質(zhì)量和生產(chǎn)成本。
  細(xì)胞破碎的實(shí)驗(yàn)室方法可通過(guò)酶解法來(lái)實(shí)現(xiàn),高壓細(xì)胞破碎儀廠家與您一起來(lái)探討:
  酶解法利用不同水解酶,如、纖維素酶、蝸牛酶和酯酶等,于37℃,pH8,處理15分鐘,可以專(zhuān)一性地將細(xì)胞壁分解,釋放出細(xì)胞內(nèi)含物,此法適用于多種微生物。例如從某些細(xì)菌細(xì)胞提取質(zhì)粒DNA時(shí),可采用(來(lái)自蛋清)破細(xì)胞壁,而在破酵母細(xì)胞時(shí),常采用蝸牛酶(來(lái)自蝸牛),將酵母細(xì)胞懸于0.1mmol/L檸檬酸一緩沖液(pH=5.4)中,加1%蝸牛酶,在30℃處理30分鐘,即可使大部分細(xì)胞壁破裂,如同時(shí)加入0.2%疏基乙醇效果會(huì)更好。此法可以與研磨法聯(lián)合使用。
  細(xì)胞培養(yǎng)和收集:將活化酵母菌株接入馬鈴薯培養(yǎng)基中,于30℃搖床培養(yǎng)。在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期離心收集細(xì)胞,制成濕菌體。
  細(xì)胞的破碎:
  1.取5ml菌液懸液于10ml的1號(hào)試管中,再取1%的蝸牛酶于2號(hào)試管中。再取0.2%的疏基乙醇于3號(hào)試管中。
  2.將三支都放入30℃的水浴中,預(yù)熱30s后,將裝有蝸牛酶的2號(hào)試管和裝有疏基乙醇的3號(hào)試管均倒入盛有菌液的試管中,在水浴中處理30分鐘。
  3.取一滴菌液鏡檢。取5個(gè)視野數(shù)出破碎細(xì)胞的個(gè)數(shù)并算出平均值。對(duì)比各種方法的破碎細(xì)胞數(shù)量。
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