Pctrifilm TM酵母菌和霉菌(Pctrifilm TM Yeast and Mold, PYM)3M測(cè)試片是一種預(yù)先制備好培育基的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)的卡片。培育基中有作為載體的冷水可溶性凝膠和對(duì)酵母菌和霉菌敏感的5-溴-4-氯-3吲哚基-磷酸鹽指示劑，以及按捺**成長的四環(huán)素、。圓形成長區(qū)域劃分為30個(gè)1 cm x1 cm的方格用來計(jì)數(shù)。

(二)設(shè)備和資料

恒溫培育箱(25 ℃~28 ℃),冰箱(0℃~4℃),均質(zhì)器(旋刀式或拍擊式),移液器， Pctrifilm TM測(cè)驗(yàn)片壓板，振蕩器，天平(感量0.1 g),培育基和試劑， Pctrifilm TM酵母菌和霉菌3M測(cè)試片，稀釋液， Butterfield's磷酸鹽緩沖液， 0.1%蛋白胨水。

（三）操作

1.固體

以無菌操作將25 g樣品加入到225 mL的稀釋液(磷酸鹽緩沖液或0.1%蛋白胨水)中，8000 r/min均質(zhì)2 min (或放入無菌均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器敲打2min),制成1 :10樣品勻液。

2.液體

取25 mL樣品原液，放入裝有225 mL,稀釋液的無菌玻璃瓶中，以30 cm起伏， 7s內(nèi)振搖25次，制成1 : 10樣品勻液。

將上述勻液做10倍系列梯度稀釋，根據(jù)樣品的污染程度，選擇適宜的2個(gè)-3個(gè)連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種2張測(cè)驗(yàn)片。

將PYM查驗(yàn)測(cè)驗(yàn)片放在平整的試驗(yàn)臺(tái)上，揭開上層膜，用移液器將1 ml樣液加到測(cè)驗(yàn)片的，悄悄覆蓋上層膜，用壓板平穩(wěn)壓下，使其均勻覆蓋在測(cè)驗(yàn)片的圓形培育面積上，拿起壓板，靜置至少1 min,使培育基凝固。

將測(cè)驗(yàn)片的通明面朝上放置于培育箱內(nèi)，堆疊不能超過20片，在25℃-28 ℃下培育3d-5d。

3.判讀

培育3d后調(diào)查計(jì)數(shù)，假如5d后，測(cè)驗(yàn)片上的菌成長過快，呈現(xiàn)邊際含糊的菌落，就用3d的計(jì)數(shù)成果作為估量菌落數(shù)。

在PYM測(cè)驗(yàn)片上，色彩均勻一致，灰白色到藍(lán)綠色或粉紅色，沒有暗色中心，鴻溝顯著的小型隆起菌落計(jì)為酵母菌。色彩多樣(棕色、米色、橙色、藍(lán)綠色等)、中心色彩深暗的大型或小型扁平分散菌落計(jì)為霉菌。

3M測(cè)試片

(四)成果核算

選取菌落數(shù)在15~150之間的測(cè)驗(yàn)片計(jì)數(shù)，平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)陳述。

①假如所有稀釋度的測(cè)驗(yàn)片上均無菌落成長，則以小于1乘以低稀釋倍數(shù)陳述。

②假如所有稀釋度測(cè)驗(yàn)片上的菌落數(shù)都小于15,則計(jì)數(shù)稀釋度低的測(cè)驗(yàn)片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)陳述。

③假如高稀釋度的菌落數(shù)大于150,計(jì)數(shù)高稀釋度的測(cè)驗(yàn)片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)陳述。計(jì)數(shù)菌落數(shù)大于150個(gè)的測(cè)驗(yàn)片時(shí)，可計(jì)數(shù)一個(gè)或兩個(gè)具有代表性方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個(gè)方格內(nèi)(1cm2)的菌落數(shù)后乘以30即為測(cè)驗(yàn)片上預(yù)算的菌落數(shù)(圓形成長面積為30 cm)。

計(jì)數(shù)在測(cè)驗(yàn)片上呈現(xiàn)堆積和彼此覆蓋的霉菌菌落，可將測(cè)驗(yàn)片分紅幾個(gè)區(qū)域，核算每個(gè)顯著暗色中心的菌落。很多的酵母菌或許會(huì)導(dǎo)致整個(gè)成長區(qū)域呈現(xiàn)藍(lán)色，很多的霉菌也可導(dǎo)致整個(gè)成長區(qū)域呈現(xiàn)藍(lán)、黑、黃等色彩，此刻測(cè)驗(yàn)片或許沒有可見菌落，但圓形培面積的邊際有許多小型菌落。當(dāng)產(chǎn)生這種情況時(shí)，不要預(yù)算菌落數(shù)，其成果計(jì)為“多不可計(jì)“ (too numerous to count, C)。

陳述每克或每毫升樣品中霉菌、酵母菌數(shù)，以“CFU/g或CFU/mL"表明。