如何用高效液相色譜（HPLC）進(jìn)行蛋白質(zhì)的純度檢測(cè)及含量測(cè)定?

首先,蛋白質(zhì)的測(cè)定一般用凝膠滲透色譜
分子量測(cè)定：用HPLC測(cè)定幾個(gè)分子量已知的蛋白質(zhì),繪制分子量與調(diào)整保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后再在相同條件下測(cè)未知蛋白的保留時(shí)間,用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照即可的未知蛋白的分子量；
含量測(cè)定：用蛋白質(zhì)標(biāo)樣配制一系列不同濃度的蛋白質(zhì)溶液,繪制蛋白質(zhì)濃度與峰高/峰面積相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,再在相同條件下測(cè)位置樣品的峰高/峰面積,即可得未知樣品的濃度；
純度測(cè)定：保證待測(cè)樣品中所有組份均出峰的情況下,用目標(biāo)蛋白的峰面積/峰高除以所有峰峰面積/峰高的總和即可的目標(biāo)蛋白的純度.

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