色譜法的分離原理
當混合物隨流動相流經色譜柱時，就會與柱中固定相發(fā)生作用(溶解、吸附等)，由于混合物中各組分物理化學性質和結構上的差異，與固定相發(fā)生作用的大小、強弱不同，在同一推動力作用下，各組分在固定相中的滯留時間不同，從而使混合物中各組分按一定順序從柱中流出。這種利用各組分在兩相中性能上的差異，使混合物中各組分分離的技術，稱為色譜法。
三高一快一廣的特點
(1)分離效率高，復雜混合物，有機同系物、異構體。
(2)靈敏度高，可以檢測出μg.g-1(10-6)級甚至ng.g-1(10-9)級的物質量。
(3)分析速度快，一般在幾分鐘或幾十分鐘內可以完成一個試樣的分析。
(4)應用范圍廣，氣相色譜：沸點低于400℃的各種有機或無機試樣的分析。液相色譜：高沸點、熱不穩(wěn)定、生物試樣的分離分析。
(5)高選擇性:對性質極為相似的組分有很強的分離能力。
分類原則
（1）按兩相狀態(tài)分類
氣相色譜(Gas Chromatography, GC)，液相色譜(Liquid Chromatography, LC)，超臨界流體色譜 (Supercritical Fluid Chromatography, SFC)。氣相色譜：流動相為氣體(稱為載氣)。常用的氣相色譜流動相有N2、H2、He等氣體，按分離柱不同可分為：填充柱色譜和毛細管柱色譜；按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜。液相色譜：流動相為液體(也稱為淋洗液)。按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。超臨界流體色譜：流動相為超臨界流體。超臨界流體是一種介于氣體和液體之間的狀態(tài)。超臨界流體色譜法是集氣相色譜法和液相色譜法的優(yōu)勢而發(fā)展起來的一種新型的色譜分離分析技術，不僅能夠分析氣相色譜不宜分析的高沸點、低揮發(fā)性的試樣組分，而且具有比高效液相色譜更快的分析速率和更高的柱效率。
（2）按操作形式分類
柱色譜(Column Chromatography, CC)固定相裝在柱管內；包括填充柱色譜和毛細管柱色譜。紙色譜(Paper Chromatography, PC)固定相為濾紙；采用適當溶劑使樣品在濾紙上展開而進行分離。薄層色譜(Thin Layer Chromatography, TLC)固定相壓成或涂成薄層；操作方法同紙色譜。
（3）按分離原理分類吸附色譜(Absorption chromatography);
分配色譜(Partition Chromatography);離子交換色譜(Ion Exchange Chromatography);凝膠色譜(Gel Chromatography)。
塔板理論和速率理論
（1）塔板理論的特點
塔板理論引入了塔板數(shù)和塔板高度作為柱效的衡量指標;不同物質在同一色譜柱上的分配系數(shù)不同，用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為衡量柱效能的指標時，應指明測定物質;柱效不能表示被分離組分的實際分離效果，當兩組分的分配系數(shù)K相同時，無論該色譜柱的塔板數(shù)多大，都無法分離。
（2）塔板理論的優(yōu)點和不足
優(yōu)點：從熱力學角度解釋了色譜流出曲線的形狀和濃度極大點的位置，闡明了保留值與k的關系，提出了評價柱校高低的n和H的計算式；不足：塔板理論的基本假設不符合色譜柱的實際分離過程。塔板理論無法解釋同一色譜柱在不同的流動相流速下柱效不同的實驗結果，不能說明色譜峰為什么會展寬，同時未能指出影響柱效的因素及提高柱效的途徑和方法。
（3）速率方程
(也稱范第姆特方程式)：H = A + B/u + C·u ， H：塔板高度; u：流動相的平均線速度(cm/s)。A ─渦流擴散項 ：A與流動相性質、流動相速率無關。要減小A值，需要從提高固定相的顆粒細度和均勻性以及填充均勻性來解決。對于空心毛細管柱，A=0。固定相顆粒越小dp↓，填充的越均勻，A↓，H↓，柱效n↑。表現(xiàn)在渦流擴散所引起的色譜峰變寬現(xiàn)象減輕，色譜峰較窄。B/u —分子擴散項 ：存在著濃度差，產生縱向擴散;擴散導致色譜峰變寬，H↑(n↓)，分離變差;;分子擴散項與流速有關，流速↓，滯留時間↑，擴散↑;擴散系數(shù)：Dg ∝(M載氣)-1/2 ; M載氣↑，B值↓。C ·u —傳質阻力項 ：dp↓， df↓, D ↑ ,可降低傳質阻力。
（4）H - u 曲線與流速
由于流速對這兩項相反的作用，流速對柱效的總影響使得存在著一個流速值，即速率方程式中塔板高度對流速的一階導數(shù)有一極小值。以塔板高度H對應流速u作圖，曲線點的流速即為流速。
（5）速率理論的要點
組分分子在柱內運行的多路徑與渦流擴散、濃度梯度所造成的分子擴散及傳質阻力使兩相間的分配平衡不能瞬間達到等因素是造成色譜峰擴展、柱效下降的主要原因；通過選擇適當?shù)墓潭ㄏ嗔６?、載氣種類、液膜厚度及載氣流速可提高柱效；速率理論為色譜分離和操作條件選擇提供了理論指導。闡明了流速和柱溫對柱效及分離的影響；各種因素相互制約，如載氣流速增大，分子擴散項的影響減小，使柱效提高，但同時傳質阻力項的影響增大，又使柱效下降;柱溫升高，有利于傳質，但又加劇了分子擴散的影響。選擇條件，才能使柱效達到。
色譜定性方法
（1）與標樣對照的方法
利用保留值定性：通過對比試樣中具有與純物質相同保留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質及在色譜圖中的位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對比。利用加入法定性：將純物質加入到試樣中，觀察各組分色譜峰的相對變化。
（2）文獻保留值定性
利用相對保留值r21定性。相對保留值r21僅與柱溫和固定相性質有關。在色譜手冊中都列有各種物質在不同固定相上的保留數(shù)據(jù)，可以用來進行定性鑒定。
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