屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室建設(shè)要求

（一）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室實驗室布局

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室物理分區(qū)為檢測區(qū)和消毒區(qū)。

1、檢測區(qū)：應(yīng)進(jìn)一步分為樣品處理區(qū)、配液區(qū)、擴(kuò)增區(qū)，嚴(yán)格分區(qū)操作。應(yīng)配置的儀器設(shè)備及耗材有：組織破碎儀（均質(zhì)器/勻漿儀）、普通離心機、渦旋振蕩器、移液器及其配套吸頭（樣品處理區(qū)和配液區(qū)各一套移液器，不能混用）。此外，需配備冰箱至少1臺（存放檢測試劑、檢測樣品、滅菌后廢棄物）、儲物柜（存放EP管、PCR管、槍頭等耗材）、垃圾桶2個（1個配備黑色垃圾袋，用于盛放普通垃圾；另1個配備黃色廢棄物專用垃圾袋，用于盛放廢棄物）。

2、消毒區(qū)：主要用于廢棄物處理，應(yīng)配備高壓滅菌鍋、純水儀、高壓滅菌袋、高壓滅菌指示條。

（二）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室儀器設(shè)備及耗材

1、屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室儀器設(shè)備：組織破碎儀（均質(zhì)器/勻漿儀）、普通離心機、渦旋振蕩器、熒光PCR儀、高壓滅菌鍋、冷藏冷凍冰箱、移液器（量程為10ul、200ul、1ml）及配套吸頭。

2、實驗耗材：（或注射器）、真空采血管（EDTA抗凝劑）、1.5mLEP管及其管架、PCR八聯(lián)管（與熒光PCR儀配套）及其管架、剪刀、鑷子等。

3、檢測試劑：應(yīng)使用批準(zhǔn)或經(jīng)中國動物疫病預(yù)防控制中心比對符合要求的檢測方法及檢測試劑盒開展檢測。

4、個人防護(hù)用品：實驗服、一次性乳膠手套、一次性口罩、一次性鞋套。

（三）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室檢測人員

至少2名檢測人員，負(fù)責(zé)樣品檢測和結(jié)果報告。檢測人員應(yīng)接受實驗室檢測技術(shù)及生物安全相關(guān)知識培訓(xùn)，熟悉分子生物學(xué)檢測。

二、屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室操作規(guī)范

（一）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品采集

駐場獸醫(yī)負(fù)責(zé)樣品采集，并填好采樣記錄表（見附表1）。樣品為生豬抗凝血（5mL，0.5%EDTA抗凝，不能使用作為抗凝劑）或全血樣品。

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品包裝

樣品包裝須符合《高致病性動物病原微生物菌（毒）或者樣本運輸包裝規(guī)范》要求。

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品保存

在12h內(nèi)檢測的樣品可暫存于4℃冰箱保存，超過12h不能檢測的樣品則置于-20℃或-70℃冰箱保存。已檢樣品應(yīng)至少保存6個月，以備復(fù)查。

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品運輸

由專人將樣品送至實驗室，必要時安排專車送達(dá)，禁止使用公共交通工具。

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品接收、開箱

接到樣品時，首先應(yīng)檢查外包裝有無損壞，并進(jìn)行登記，如有破損應(yīng)立即報告駐場獸醫(yī)。不管外包裝有無損壞，都要在外包裝（冷藏箱或泡沫箱）四周噴灑消毒劑（含2.3%有效氯的次氯酸鹽），作用30 分鐘（為防止噴灑的消毒液干燥，中途再噴灑一次）。開箱后在樣品箱內(nèi)側(cè)充分噴灑消毒劑，翻動冰袋，再次噴灑，保證所有角落和內(nèi)壁均被噴灑消毒劑。樣品箱的消毒、樣品取出等動作應(yīng)輕緩，以減少氣溶膠產(chǎn)生。

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室樣品檢測

嚴(yán)格按照試劑說明書的操作步驟進(jìn)行檢測。

熟悉操作，縮短檢測過程，以減少各種有害因素對核酸的破壞。

所有試劑開蓋前都應(yīng)先瞬時離心，避免液體飛濺；若液體不小心濺到手套或桌面上，應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面。

樣品處理、配液、擴(kuò)增嚴(yán)格分區(qū)，儀器、耗材等嚴(yán)禁交叉混用。

加樣時嚴(yán)禁吹打。

熒光探針應(yīng)避光保存，反應(yīng)液現(xiàn)配現(xiàn)用，加入核酸后應(yīng)盡快上機。

不要在熒光定量PCR管蓋的采光部位做任何標(biāo)記，不能用手接觸PCR管

蓋上的采光部位。

原始記錄

實驗完成后應(yīng)填寫并保存相關(guān)檢測原始記錄（見附表2），檢測原始記錄、PCR圖至少保存5年。

屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室檢測報告

根據(jù)《關(guān)于全面開展生豬屠宰環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測工作有關(guān)具體要求的通知》（川動監(jiān)[2019]5號）要求，屠宰企業(yè)檢測結(jié)果應(yīng)規(guī)范出具《檢測報告》（見附表3），載明對應(yīng)的檢疫合格證明編號、檢測方法、檢測日期、檢測結(jié)果。檢測報告必須經(jīng)由報告編制人、駐場獸醫(yī)和批準(zhǔn)人（場點負(fù)責(zé)人）簽字確認(rèn)，加蓋屠宰企業(yè)公章方為有效。檢測報告一式兩份，一份交企業(yè)所在縣（市、區(qū)）動物疫病預(yù)防控制中心存檔，一份為屠宰企業(yè)自行留存，保存期至少5年。

（九）結(jié)果處理

1、檢測結(jié)果為陰性，同批生豬產(chǎn)品上市銷售。

2、檢測結(jié)果為陽性，應(yīng)立即停止生產(chǎn)，將檢測結(jié)果報告駐場獸醫(yī)，并及時將陽性樣品送所在縣級動物疫病預(yù)防控制中心，待復(fù)核后再做處理。復(fù)核為陽性的按照《非洲豬瘟疫情應(yīng)急實施方案（2019年版）》的規(guī)定采取應(yīng)急處置措施處理。

三、屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室生物安全要求

（一）采樣生物安全

1、正確穿戴好口罩、手套、鞋套、實驗服等個人防護(hù)用品。

2、盡可能使用物理設(shè)備保定動物，既保證人的安全，又保證樣品質(zhì)量。

3、一頭豬一個注射器或一個真空，避免樣品交叉污染。

4、采樣結(jié)束，采樣人員脫去個人防護(hù)用品，并對采樣環(huán)境清潔消毒。

（二）檢測過程中的生物安全

1、檢查樣品外包裝有無損壞，并對外包裝進(jìn)行消毒。

2、注射器使用完后必須放置于專用廢棄盒中待高壓滅菌處理，高壓滅菌前不得拆卸針頭和注射器。

3、盡量使用帶濾芯的移液器吸頭，不用移液器混勻液體。

4、對于管壁上沾有懸液的離心管，應(yīng)短暫離心后再打開管蓋。

5、核酸提取完成后應(yīng)在更換手套后再進(jìn)行配液。

6、配液區(qū)和核酸提取區(qū)嚴(yán)格分開，儀器、耗材等嚴(yán)禁交叉混用。

（三）檢測后實驗室消毒

1、實驗室臺面、桌椅、櫥柜、門把手、水龍頭等物品的表面可用有效氯濃度為0.1%-0.5%的消毒劑噴灑，作用30min后用清水擦拭。

2、實驗室地面可用有效氯濃度為0.1%-0.5%的消毒劑噴霧或拖地，各實驗室拖把應(yīng)專用，不得混用。

3、廢液缸、剪刀、鑷子等可回收物，用消毒液浸泡30min后用清水清洗，可高溫滅菌的用牛皮紙等包好后高壓（121℃，20min）滅菌備用。

4、實驗服等可重復(fù)利用的棉織制品，可經(jīng)121℃、20min高壓滅菌、清洗后使用，也可用氯化物、酚化物等消毒劑浸泡30min，清水清洗后晾干備用。

5、儀器設(shè)備：組織勻漿儀、離心機、PCR儀等設(shè)備的金屬部件使用75%乙醇擦拭消毒，非金屬部件可使用含2.3%有效氯的次氯酸鹽消毒30min，然后清水洗凈或擦拭。

（四）屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測實驗室廢棄物處理

1、以下廢棄物需進(jìn)行高壓滅菌處理：（1）超過留存期的所有樣品；（2）使用后的槍頭、EP管、等；（3）一次性個人防護(hù)用品，如口罩、手套、鞋套等；（4）注射器針頭等銳器使用后應(yīng)直接棄置于耐高壓、防穿透的容器內(nèi)。將上述廢棄物放入醫(yī)療廢物袋，并在廢物袋的中心位置放置高壓指示帶或化學(xué)指示卡，袋口應(yīng)稍微扎口（不能太緊），袋口和外表面噴灑消毒劑，121℃高壓蒸汽處理20分鐘，然后將滅菌后的廢棄物存放在冰柜中，定期交由有資質(zhì)的無害化處理公司進(jìn)行無害化處理。

2、使用后的PCR反應(yīng)管（內(nèi)含反應(yīng)產(chǎn)物）直接棄置于醫(yī)療廢物袋中，禁止開蓋（以免造成氣溶膠污染），交由無害化公司處理或者焚燒處理。