FDA清洗驗證檢查建議
I． 引言
自FDA各種文件（包括化學(xué)原料藥檢查指南、生物技術(shù)檢查指南）提出這個問題之后，清洗過程的驗證已經(jīng)引發(fā)了很多討論。FDA的文件明確指出要求對清洗過程進(jìn)行驗證。
本指南討論了各種可接受（或不可接受）的驗證方法，從而使FDA的檢查具有一致性。但必須清楚地認(rèn)識到：與其他工藝驗證一樣，清洗驗證方法也不止一種。所有過程驗證的檢查標(biāo)準(zhǔn)是：檢查其科學(xué)數(shù)據(jù)能否證明系統(tǒng)穩(wěn)定一致地達(dá)到預(yù)期目的，系統(tǒng)結(jié)果穩(wěn)定地符合預(yù)先制定的標(biāo)準(zhǔn)。
本指南僅適用于設(shè)備化學(xué)殘留物的清洗驗證。
II． 背景
對于FDA而言，使用設(shè)備前進(jìn)行清洗不是什么新要求。1963年GMP法（133.4）規(guī)定“設(shè)備應(yīng)處于清潔、有序的狀態(tài)”。1978年的cGMP中規(guī)定了設(shè)備清洗的章節(jié)（211.67）。要求清洗設(shè)備的主要目的還是防止污染或混料。由于設(shè)備清洗維護(hù)不當(dāng)或防塵管理不當(dāng)，F(xiàn)DA檢查官曾十分注意檢查衛(wèi)生狀況。過去FDA總是更注意檢查類與非類藥物之間的交叉污染、藥品與甾類物質(zhì)或激素之間的交叉污染問題。在過去二十年間，因?qū)嶋H或潛在的交叉污染問題已從市場上撤回了大量的藥品。
另一個事件使FDA對交叉污染問題日益重視，即1988年從市場上撤回了消膽胺成品制劑，原因是規(guī)程不當(dāng)。生產(chǎn)該制劑的原料藥受到了農(nóng)業(yè)殺蟲劑生產(chǎn)中少量中間體和降解物質(zhì)的污染。造成交叉污染的主要原因使用了回收溶媒。而回收溶媒受到了污染，原因是對溶媒桶的重復(fù)使用缺少監(jiān)控。貯存殺蟲劑產(chǎn)生的回收溶媒桶又重復(fù)地用于貯存該藥品生產(chǎn)中的回收溶媒。而工廠沒有對這些溶媒桶進(jìn)行有效的監(jiān)控，沒有對其中的溶媒進(jìn)行有效的檢驗，也沒有對桶的清洗規(guī)程進(jìn)行驗證。
被殺蟲劑污染的部份化學(xué)原料藥運到了另一地點的第二家工廠生產(chǎn)制劑，使該工廠的流化床干燥器中物料袋受到了殺蟲劑的污染，料造成各批產(chǎn)品受到污染，而該工廠根本就沒有生產(chǎn)殺蟲劑。
1992年，F(xiàn)DA對一家海外原料藥生產(chǎn)廠發(fā)出了進(jìn)口警告，該工廠使用同一設(shè)備生產(chǎn)強力甾類物質(zhì)和非甾類物質(zhì)。該工廠是多品種原料藥生產(chǎn)廠。FDA認(rèn)為交叉污染的可能性很大，對公眾的健康造成了嚴(yán)重威脅。該工廠僅在FDA檢查時開始清洗驗證工作，F(xiàn)DA在檢查時認(rèn)為該清洗驗證不當(dāng)。理由之一是：工廠僅尋找沒有前一種物質(zhì)存在的證據(jù)。但是用TLC法檢驗洗滌水之后，找到了設(shè)備中還殘留了前一產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的副反應(yīng)物質(zhì)和降解物質(zhì)的證據(jù)。
III． 清洗驗證的要求通則
FDA要求：建立書面標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），其中必須詳細(xì)規(guī)定設(shè)備各部件的清洗過程。若同一產(chǎn)品、不同批號的清洗使用一種方法，而更換品種時使用另一種清洗方法，應(yīng)在書面規(guī)程中說明清洗方法的不同之處。同樣，若水溶性殘留物質(zhì)與非水溶性殘留物質(zhì)的清洗方法不同，則書面規(guī)程中也應(yīng)對兩種方法進(jìn)行說明，必須明確規(guī)定在什么情況下執(zhí)行哪一種清洗方法。
化學(xué)原料藥生產(chǎn)中產(chǎn)生柏油狀或粘膠狀殘留物質(zhì)的某些生產(chǎn)工序，可考慮使用專用設(shè)備。流化床干燥器物料袋也是一種難以清洗的設(shè)備，通常也只用于一種產(chǎn)品的生產(chǎn)。
清洗過程本身產(chǎn)生的所有殘留物質(zhì)（洗滌劑、溶媒、等）也必須從設(shè)備中除去。
FDA要求：必須建立書面的清洗方法驗證通則。
FDA要求：清洗方法驗證通則應(yīng)規(guī)定執(zhí)行驗證的負(fù)責(zé)人、批準(zhǔn)驗證工作的負(fù)責(zé)人、驗證標(biāo)準(zhǔn)（合格標(biāo)準(zhǔn)）、再驗證的時間。
FDA要求：對各生產(chǎn)系統(tǒng)或各設(shè)備部件進(jìn)行清洗驗證之前，應(yīng)制定專一特定的書面驗證計劃，其中應(yīng)規(guī)定取樣規(guī)程、分析方法（包括分析方法的靈敏度）。
FDA要求：按上述驗證計劃進(jìn)行驗證工作，記錄驗證結(jié)果。
FDA要求：做出最終的驗證報告，報告應(yīng)由有關(guān)管理人員批準(zhǔn)，并說明該清洗方法是否有效。報告中的數(shù)據(jù)應(yīng)支持結(jié)論，即：“殘留物質(zhì)已經(jīng)減少到了’可接受的限度’”。
IV． 清洗驗證的評價（檢查）
首先，應(yīng)重點關(guān)注驗證過程的目的。我們曾遇到過有些公司就沒有建立驗證的目的。很多工廠在驗證時取了大量的樣品，做了大量的檢驗，卻沒有對清洗各步操作的效果做出真正的評價。
評價清洗方法時，應(yīng)注意幾個問題：如，設(shè)備部件或設(shè)備系統(tǒng)到什么程度才算清潔？是否必須要用手擦洗？用手擦洗而不用溶媒清洗會得到什么效果？人工清洗時，批與批之間、不同之間有多大差異？評價和檢查清洗方法時，這些問題都十分重要，因為檢查官必須確定該清洗方法的效果（有效性）。而且這些問題也有助于省去多余的步驟而有效地工作，從而為公司節(jié)約資源。
檢查每個設(shè)備部件有幾種清洗方法。理想地說，一個設(shè)備部件或一個系統(tǒng)只有一種清洗方法，但這還取決于生產(chǎn)的品種，以及同一品種不同批號之間、或不同品種之間是否需要清洗。若該清洗方法只用于同一品種不同批號（或同一種中間體的不同批號），則只需要達(dá)到“目視清潔”的標(biāo)準(zhǔn)即可，這種批與批之間的清洗不需要驗證。
1． 設(shè)備的型式
檢查設(shè)備的型式，尤其是使用半自動或全自動現(xiàn)場清洗（CIP，Clean-in-place）系統(tǒng)的大型生產(chǎn)系統(tǒng)，需要重點檢查。如，應(yīng)該使用沒有球閥的衛(wèi)生型管道系統(tǒng)。若使用了非衛(wèi)生型的球閥（這在原料藥生產(chǎn)中很普遍），清洗就會十分困難。
若在現(xiàn)場檢查中發(fā)現(xiàn)使用了上述類型的設(shè)備系統(tǒng)，清洗操作人員必須對這種問題有所認(rèn)識，必須經(jīng)過特殊培訓(xùn)，從而能夠正確清洗系統(tǒng)和閥門。要檢查操作工人對設(shè)備系統(tǒng)的了解程度、培訓(xùn)水平和現(xiàn)場清洗操作的經(jīng)驗。還要檢查書面的、驗證后的清洗方法，從而確定設(shè)備系統(tǒng)的清洗得到了正確的驗證。
對于大型系統(tǒng)，如，使用長輸送管道的設(shè)備，要檢查流程圖和管線圖，從而確定需要清洗的閥門以及是否有書面的清洗規(guī)程。需要清洗的管道和閥門應(yīng)做出標(biāo)記，易于操作人員識別。閥門標(biāo)識不當(dāng)（無論是圖紙還是實物）均會導(dǎo)致清洗不正確。
必須檢查清洗記錄是否記錄了關(guān)鍵因素。檢查生產(chǎn)工序結(jié)束至清洗開始的時間長短，這對于外用劑、懸浮劑和原料藥的生產(chǎn)尤為重要。因為殘留物質(zhì)干燥后，會直接影響清洗的效果。
無論是否使用現(xiàn)場在線清洗裝置，都應(yīng)考慮檢查設(shè)備清洗中的微生物菌情況。這需要很多預(yù)防措施，而不是在染菌之后再除菌。應(yīng)有證據(jù)證明：設(shè)備的日常清洗和貯存不會繁殖微生物菌。如，設(shè)備貯存之前應(yīng)進(jìn)行干燥，清洗后的積水絕不能遺留在設(shè)備中。
清洗之后，會對設(shè)備進(jìn)行消毒（雖然設(shè)備可能是用于無菌生產(chǎn)或非無菌生產(chǎn)，但產(chǎn)品會產(chǎn)生微生物菌）。雖然本指南不針對消毒過程，但仍應(yīng)注意檢查清洗過程和貯備過程對微生物菌的控制程度，從而保證在后續(xù)的消毒過程中能夠達(dá)到無菌規(guī)定要求。從無菌生產(chǎn)中熱原控制要求方面而言，這一點也十分重要。因為設(shè)備消毒無法使大量熱原滅活或除去大量熱原。
2． 書面清洗規(guī)程
規(guī)程和記錄
要檢查驗證后的清洗方法是否專一、詳細(xì)，檢查需要記錄的項目。我們曾見過許多SOP通則，涉及了許多批生產(chǎn)記錄，其中要求對每一步操作做出專門的記錄。系統(tǒng)的復(fù)雜程度不同，清洗方法以及操作人員培訓(xùn)程度和能力也不同，各種清洗工作或規(guī)程記錄的數(shù)量也會有不同。
需要進(jìn)行更為復(fù)雜的清洗記錄時，必須對關(guān)鍵的清洗工序做出記錄（如，某些原粉合成工序），應(yīng)有專門的設(shè)備記錄，包括清洗人員姓名、清洗時間。相對簡單的清洗工作僅記錄“全部清洗工作已經(jīng)執(zhí)行”就足夠了。
其他因素，如清洗歷史、清洗后測出的殘留物水平、檢驗結(jié)果的可變性等有時也要記錄。如，清洗之后，殘留物含量具可變性，而又認(rèn)定該清洗方法是可接受的，則必須證明清洗過程和工人操作的有效性。必須對清洗方法做出正確的評價，尤其是認(rèn)為工人操作有問題時，就更要求做出更為詳細(xì)的記錄，進(jìn)行更多的培訓(xùn)。
3． 分析方法
應(yīng)檢查殘留物或污染物分析方法的專一性和靈敏度。借助于的分析技術(shù)，清洗和生產(chǎn)過程中極少的殘留物或污染物也能夠被檢查出來。檢驗不出污染物或殘留物濃度，并不能說明清洗之后不存在殘留物污染物，而只說明樣品中沒有分析方
法靈敏度之內(nèi)或檢驗之內(nèi)的污染物。工廠應(yīng)對分析方法進(jìn)行挑戰(zhàn)性實驗，即：證明取樣方法能夠從設(shè)備表面取到污染物，其收率是多少，如50%, 90%等。根據(jù)取樣結(jié)果再做出結(jié)論。取樣技術(shù)不當(dāng)也會得出相反的結(jié)論（見下述）。
4． 取樣
可接受方法有的兩種。是直接從設(shè)備表面取樣。另一種方法是取漂洗水樣。
a. 表面直接取樣法
檢查取樣的類型，以及對檢驗數(shù)據(jù)的影響。取樣器具可能會干擾檢驗結(jié)果。如，已發(fā)現(xiàn)取樣拭上的粘膠會干擾樣品的分析。在驗證初期，必須保證使用適當(dāng)?shù)娜咏橘|(zhì)和溶媒（用于從取樣介質(zhì)中提取樣品），并且方便使用。
直接取樣法的優(yōu)點在于：能夠?qū)ψ铍y清洗、能夠到達(dá)的表面清洗程度進(jìn)行評價，從而確定選定的單位面積上殘留物/污染物含量。此外，還能夠取到“干燥”后或不溶性殘留物樣品。
b. 漂洗液樣品
具有兩點優(yōu)勢：能夠?qū)^大表面積進(jìn)行取樣；能夠?qū)Φ竭_(dá)不到的系統(tǒng)或日常工作無法拆卸的部位取樣并做出評價。
其缺陷是：殘留物或污染物可能是不溶性或吸藏在設(shè)備中。此時，可使用“臟點”類推法進(jìn)行評價，干燥的殘留物檢驗，更不能檢測漂洗水樣，而是檢查“臟點”，從而確定清洗是否干凈。
通過檢驗漂洗水樣來驗證清洗方法時，應(yīng)檢查是否直接檢驗了漂洗水樣中的殘留物或污染物。若僅檢測漂洗水樣的水質(zhì)情況，而不測定可能存在的污染物含量，這種做法是不能接受的。
c. 日常生產(chǎn)的中間控制
進(jìn)行監(jiān)測：分析方法得到驗證之后，日常檢驗可使用間接檢驗法，如電導(dǎo)率項目測定。由于原料藥生產(chǎn)使用了反應(yīng)罐和離心機，大型設(shè)備之間用管道連接，因此只能取漂洗水樣。這種情況下，日常檢驗更需采用間接檢驗法。但必須證明間接檢驗法與設(shè)備狀況的相關(guān)性。應(yīng)驗證并有書面證據(jù)證明：用間接法檢驗未清洗設(shè)備時，檢驗結(jié)果能夠證明設(shè)備不能使用以及未清洗。即：該檢驗結(jié)果能夠得出不能夠接受當(dāng)前設(shè)備狀況的結(jié)論。
V．殘留物/污染物的建立
對于清洗方法是否得到了驗證，F(xiàn)DA不打算建立統(tǒng)一的判斷標(biāo)準(zhǔn)，這也沒有意義。因為原料藥、制劑生產(chǎn)的品種范圍太多。工廠應(yīng)根據(jù)自身對該藥品的理解確定合理的殘留，該應(yīng)是實際可測的。工廠還應(yīng)證明分析方法的靈敏度，這一點十分重要。工業(yè)界已提出分析檢測的標(biāo)準(zhǔn)，如：10ppm；生物活性檢測標(biāo)準(zhǔn)，如正常治療劑量的1/1000；或感官標(biāo)準(zhǔn)，如“無視在殘留物”，等等。
要檢查建立殘留標(biāo)準(zhǔn)的方式。在這方面，原料藥與制劑不同。制劑生產(chǎn)是已知殘留物的化學(xué)名稱（如來自于活性成份、非活性成份、洗滌劑等），而原料藥可能會無法得知，會有部份反應(yīng)物和其他副產(chǎn)物。僅注意重要反應(yīng)物的殘留是不夠的，因為其他化學(xué)變量可能更難以除去。此時，除化學(xué)分析之外，可能還需要TLC法。原料藥生產(chǎn)中，尤其是強力化學(xué)藥物，如甾類物質(zhì)，若不使用專用設(shè)備，就必須考慮副產(chǎn)物殘留量的問題。檢查的目的是保證所有的規(guī)定有科學(xué)的依據(jù)。
VI． 其他問題
a. 無效對照劑
評價和驗證清洗方法時，有些工廠在相同設(shè)備、相同操作參數(shù)下生產(chǎn)無效對照劑進(jìn)行驗證。然后檢驗分析該批無效對照劑，測定是否受到了上批藥品殘留物的污染。但是，我們已經(jīng)記錄了使用無效對照劑驗證的幾個問題。
首先是無法肯定藥品殘留物是否均勻分布于生產(chǎn)系統(tǒng)內(nèi)。若出料閥或混料機斜槽受到了污染，分布于無效對照劑中的藥品殘留物也不均勻，出料起始階段對照劑中藥品殘留量分布通常最多。此外，若污染物或殘留物粒度較大，在對照劑中分布也不可能均勻。
有些工廠假定殘留物均勻地?fù)p耗于設(shè)備表面，這是無效的結(jié)論。而且任何強有力的分析手段都會因污染物的稀釋而受到削弱。由于這些問題的存在，無效對照劑驗證法應(yīng)與漂洗水樣檢驗或直接取樣檢驗結(jié)合使用。
b. 洗滌劑
若使用洗滌劑或肥皂清洗，應(yīng)考慮檢驗殘留物質(zhì)時可能會遇到的困難。常見問題是洗滌劑的組成問題。許多洗滌劑供應(yīng)商不會提供詳細(xì)的配方，使用戶無法評價其殘留物。與藥品殘留物一樣，工廠應(yīng)評價使用洗滌劑清洗的有效性、以及除去洗滌劑殘留物的有效性，這十分重要。但是，與藥品殘留物要求不同的是：清洗之后，不得有任何濃度的洗滌劑殘留物存在（或?qū)τ诟哽`敏度的分析方法而言，其殘留物濃度必須極低）。洗滌劑不是生產(chǎn)工序中的物質(zhì)，而僅僅是用于幫助清洗而加入的物質(zhì)。因此，洗滌劑應(yīng)易于清除。否則，就應(yīng)選擇另一種類型的洗滌劑。
c. 檢驗直至清潔
有些工廠的做法是：自清洗開始就一直不斷地檢驗和評價多次檢驗結(jié)果，直到潔凈為止。他們對設(shè)備和系統(tǒng)取樣、檢驗，再取樣、再檢驗，直至得到一個“可接受”的殘留量水平。對于采用經(jīng)過驗證的清洗方法對設(shè)備或系統(tǒng)進(jìn)行清洗時，不應(yīng)采取這種重復(fù)取樣的做法。這種做法只有在極少數(shù)情況下可以接受。不斷地檢驗和取樣只能說明一個問題：即，所采用的清洗方法沒有得到驗證。因為不斷復(fù)試實際上反映并記錄了這樣一個事實：即，進(jìn)行無效清洗之后，仍有超量的殘留物/污染物存在。
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