關(guān)于這個(gè)問(wèn)題，有標(biāo)準(zhǔn)和種類之分，答案并不是十分固定的

　　通常，我們會(huì)將光學(xué)顯微鏡業(yè)務(wù)依照不同的用戶群(其實(shí)就是不同的應(yīng)用領(lǐng)域)分成生命科學(xué)和工業(yè)技術(shù)兩大類;由于交叉學(xué)科越來(lái)越多，難免應(yīng)用領(lǐng)域會(huì)有一定程度的重疊，但重疊比例小，產(chǎn)生問(wèn)題，也都內(nèi)部消化解決。

　　討論之前，有幾個(gè)前提：

　　(1)討論主要針對(duì)普通、常規(guī)光學(xué)顯微鏡來(lái)進(jìn)行討論

　　(2)部分特殊類型的顯微鏡后面會(huì)有一定程度地涉及

　　(3)光學(xué)顯微鏡，尤其是應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域的顯微鏡，很多時(shí)候是在扮演平臺(tái)的角色，所以，會(huì)有各種亂入，請(qǐng)大家慎重

　　(4)復(fù)雜的光路問(wèn)題，不做深入涉及，能所不能及

　　PART ONE：

　　1、雙光路設(shè)計(jì)

　　以生命科學(xué)領(lǐng)域來(lái)說(shuō)，絕大部分的光學(xué)顯微鏡都是單光路設(shè)計(jì)的顯微鏡;有一類顯微鏡，稱之為，體式顯微鏡(Stereo Microscopes / Macroscopes)，或?qū)嶓w顯微鏡，或解剖鏡，是雙光路設(shè)計(jì)，即模仿人眼光路，對(duì)標(biāo)本獲取具有立體感的正像的顯微鏡。光路可見(jiàn)下圖：

　　那體式顯微鏡，會(huì)為了不同的實(shí)驗(yàn)要求有不同樣的配置，而且不同配置主要集中在光源的類型，和是否能觀察熒光，當(dāng)然，還有是否需要加裝成像系統(tǒng)等。但與其他光學(xué)顯微鏡的區(qū)別在于，雙光路設(shè)計(jì);

　　2、單光路設(shè)計(jì)

　　除上述的體式顯微鏡以外，其他的光學(xué)顯微鏡，無(wú)論簡(jiǎn)單還是復(fù)雜，都可以被籠統(tǒng)地被劃歸到單光路顯微鏡這一大類，很大的類，的類，里面來(lái)~~~

　　那在這個(gè)類別里面，我們?cè)賮?lái)細(xì)說(shuō)：

　　2.1 正置顯微鏡

　　先上圖，先一張L記家的正置顯微鏡DM2500.局部大圖用O記的BX63：

　　其實(shí)，對(duì)于正置顯微鏡的判別很簡(jiǎn)單，你就看物鏡和載物臺(tái)的位置關(guān)系就可以了：

　　——如果物鏡在載物臺(tái)上方的，就是正置顯微鏡;

　　——如果物鏡在載物臺(tái)下方的，就是倒置顯微鏡(倒置顯微鏡后面會(huì)專門(mén)說(shuō)，莫急莫催);

　　那有人問(wèn)，L記家的那個(gè)上面觀察的地方，不也是兩個(gè)黑槍口嘛，是不是就是之前說(shuō)到的雙光路設(shè)計(jì)?

　　非也，非也！

　　需要強(qiáng)調(diào)的是：

　　(1)在體式顯微鏡中，人家的雙光路是從一開(kāi)始的光源那里，就是獨(dú)立的雙光路，每個(gè)光路帶著不盡相同的信息量的，看到的圖像也是立體的;

　　(2)在正置顯微鏡中，光路從一開(kāi)始的光源那里，就只是單光路;只是為了照顧要用兩個(gè)眼睛觀察的人類，才在光路快要結(jié)束的地方，用棱鏡把一個(gè)光路拆成了兩個(gè)光路，每個(gè)光路帶的信息量，是相同的，看到的圖像也只是平面的;

　　那么對(duì)于應(yīng)用來(lái)說(shuō)，正置顯微鏡受限于物鏡到載物臺(tái)之間的距離，主要用來(lái)觀察病理切片等薄的樣品標(biāo)本;再次強(qiáng)調(diào)，特殊的應(yīng)用，我們這里暫時(shí)不提;

　　2.2 倒置顯微鏡

　　還是先上圖，以N記TS100為例：

　　還記得超級(jí)簡(jiǎn)單的分辨標(biāo)準(zhǔn)嗎?看物鏡和載物臺(tái)的相對(duì)位置——物鏡在載物臺(tái)下方的，為倒置顯微鏡;至于是單光路顯微鏡，還是雙光路顯微鏡，請(qǐng)參考上面正置顯微鏡部分;

　　對(duì)于倒置光學(xué)顯微鏡來(lái)說(shuō)，雖然物鏡到載物臺(tái)的距離已經(jīng)不會(huì)很遠(yuǎn)，但是，你要知道，物鏡在載物臺(tái)下面啊，親!載物臺(tái)上方的空間好大的呀!你不僅可以放切片，放培養(yǎng)皿，而且可以放培養(yǎng)瓶，多孔板，甚至你可以考慮把活體小動(dòng)物固定在上面(生動(dòng)畫(huà)面請(qǐng)自行腦補(bǔ))

　　至此，對(duì)于光學(xué)顯微鏡的最基本的分類就差不多了，但是，還有一些小問(wèn)題需要在這里做補(bǔ)充：

　　(1)上面所有提到的光學(xué)顯微鏡，所使用的光源，都是面場(chǎng)光源，比如鹵素?zé)簟⒐療?、汞氙燈、LED等，等等等等;

　　(2)為了實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，聰明的人類啊，搞出來(lái)了很多種觀察方式，一般歸類七種，明場(chǎng)(Bright Field)，暗場(chǎng)(Dark Field)，相差(Phase Contrast)，相襯(Relife Contrast)，微分干涉(Differential Interference Contrast)，偏光觀察(Polarising Observation)和熒光觀察(FL)——每種觀察方式的成像原理和光路結(jié)構(gòu)是不同的;

　　雖然有人愿意按照觀察方式對(duì)顯微鏡進(jìn)行分類，但是，個(gè)人覺(jué)得沒(méi)意義：因?yàn)橐慌_(tái)顯微鏡又不是只能實(shí)現(xiàn)一種觀察方式，能看BF的，說(shuō)不定也能看PH，還能看FL， 你說(shuō)算哪個(gè)?

　　(3)至于有提及按照單目、雙目、三目來(lái)分，可以這樣分類，但是會(huì)有很大的局限性：首先，單目光學(xué)顯微鏡已經(jīng)很少見(jiàn)了，超級(jí)普遍都是雙目顯微鏡標(biāo)配;其次，那所謂的三目，就看用戶是否需要外接成像系統(tǒng)進(jìn)行顯微圖像的數(shù)碼采集，如果需要，就是三目;可見(jiàn)下圖，還是以O(shè)記為例：

　　BUT，對(duì)于PART TWO中提到的一些顯微鏡，你就沒(méi)有辦法按照這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類了，因?yàn)?，那些系統(tǒng)對(duì)于顯微圖像的數(shù)碼采集的設(shè)備是標(biāo)配，是默認(rèn)的，是在機(jī)器系統(tǒng)里的;

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　　PART TWO

　　在上一部分最后，有強(qiáng)調(diào)了一下使用面場(chǎng)光源的顯微鏡，其實(shí)也就是，會(huì)有顯微鏡使用的不是面場(chǎng)光源，比如點(diǎn)光源。我嘗試著說(shuō)一說(shuō)。

　　1、激光掃描共聚焦

　　先上圖(Z記的LSM)：

　　這里舉例的是激光掃描共聚焦(Laser Scanning Confocal Microscopy);光源是激光(點(diǎn)光源)，成像是靠點(diǎn)構(gòu)成線，線構(gòu)成面這樣掃出來(lái)的，共聚焦嘛，就涉及到光路結(jié)構(gòu)了，大家可以參考下圖，自行理解;但是，從上圖中，大家可以看出，激光掃描共聚焦要是參考PART ONE的分類來(lái)看，就比較不那么容易了——可以在正置顯微鏡上做，也可以在倒置顯微鏡上做;

　　2、雙光子

　　我就直接“借用”百科的解釋(雙光子顯微鏡_百科)：雙光子熒光顯微鏡是結(jié)合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術(shù)的一種新技術(shù)。雙光子激發(fā)的基本原理是：在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時(shí)吸收 2 個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子，在經(jīng)過(guò)一個(gè)很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時(shí)間后，發(fā)射出一個(gè)波長(zhǎng)較短的光子;其效果和使用一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細(xì)胞，雙光子顯微鏡[1]使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量，其脈沖寬度只有 100 飛秒，而其周期可以達(dá)到 80 至 100 兆赫。在使用高數(shù)值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時(shí)，物鏡的焦點(diǎn)處的光子密度是的，雙光子激發(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點(diǎn)上，所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦針孔，提高了熒光檢測(cè)效率。

　　大家直接看圖吧，O記的FV1200MPE：

　　一樣，你可以把這個(gè)成像技術(shù)在正置上實(shí)現(xiàn)，在倒置上實(shí)現(xiàn);

　　3、應(yīng)用

　　無(wú)論是激光掃描共聚焦還是雙光子，主要還是要看標(biāo)本的熒光信號(hào)，從差別上說(shuō)：

　　(1)在一定深度范圍內(nèi)，激光掃描共聚焦可以剝離掉非焦平面的熒光信號(hào)，在上保證你所采集到的都是在焦面層面的清晰信號(hào)，獲取高質(zhì)量的熒光圖像;

　　(2)在更深層面的范圍內(nèi)，雙光子更進(jìn)一步的排除掉各方面的干擾，更進(jìn)一步地幫助你獲取深層次的熒光信號(hào)圖像;若要將激光掃描共聚焦和雙光子做對(duì)比，可以參考下圖(其中，紅色是激光掃描共聚焦采集到的信號(hào)，最深也就110微米;綠色的是雙光子采集到的信號(hào)，最深300微米;Z軸表明深度;)

　　那有人會(huì)問(wèn)，雙光子最深可以到多少?借助一定的輔助手段(樣品處理啦，物鏡選擇啦，等等等等)，雙光子可實(shí)現(xiàn)最深8mm的成像，上圖只是4mm的深度，僅供參考;